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PRÁCTICAS BIOLOGÍA I

 

LABORATORIO DE MICROSCOPÍA

 

INTRODUCCIÓN:

El microscopio es un instrumento óptico que aumenta la imagen de los objetos. En los últimos tres siglos ha permitido ampliar el campo de las investigaciones biológicas y se ha convertido en el instrumento básico para abrir nuevas fronteras en la biología. La lupa puede considerarse como el microscopio más simple y fue usada inicialmente por algunos investigadores para adquirir los primeros conocimientos del mundo microscópico. Posteriormente se perfeccionó y en la actualidad existen varios tipos de microscopios, algunos de ellos altamente especializados para una gran variedad de usos. Entre los diferentes tipos podemos citar: microscopio simple, compuesto, de luz ultravioleta, de luz polarizada y electrónico.

Anton Van Leeuwenhoek, Hans y Zacharias Jansen fueron tres holandeses que contribuyeron significativamente al desarrollo de la microscopía a principios del siglo XVII. Leeuwenhoek fue uno de los primeros en dejar constancia de sus observaciones, describiendo bacterias, protozoarios, glóbulos rojos y espermatozoides.

El microscopio, al aumentar la imagen de los objetos, nos permite analizar la estructura interna de células, tejidos y organismos, hacer mediciones y estimar el tamaño de una población de microorganismos.

En las prácticas de este curso se utilizará el microscopio compuesto en el cual se combinan dos lentes, el ocular y el objetivo, para aumentar la imagen.

 

1. OBJETIVOS:

  • Conocer las diferentes partes del microscopio compuesto y sus respectivas funciones.
  • Aprender a manejar correctamente el microscopio.
  • Hacer el montaje de placas temporales.
  • Observar muestras en el microscopio.
  • Determinar el tamaño del campo visual del microscopio.
  • Adquirir destreza para calcular las medidas de estructuras celulares, células y organismos.
  • Dar a conocer las unidades de medida de mayor uso en micrometría.
  • Reconocer la importancia del microscopio en el desarrollo de las ciencias biológicas.

 

2. MATERIALES:

  • Microscopios compuestos
  • Portaobjetos
  • Cubreobjetos
  • Papel delgado con letras impresas
  • Goteros
  • Papel milimitrado

 

3. PROCEDIMIENTO:

3.1 Cuidados del microscopio:

Es importante tener en cuenta los siguientes cuidados y precauciones al usar el microscopio:

  • Cuando se transporte el microscopio tómelo siempre con las dos manos. Nunca tenga objetos adicionales en sus manos.
  • Al colocar el microscopio sobre la mesa, sitúelo a unos 10 o 15 cm del borde.
  • Si se requiere limpiar los lentes utilice sólo el papel y solución destinada para tal fin. No utilice ningún otro tipo de papel.
  • Nunca use el lente de inmersión si no se le ha solicitado hacerlo. Recuerde que se requiere el uso de aceite, y si no lo hace puede dañar el lente.
  • Cuando termine de trabajar deje el microscopio en el lente objetivo de 4X.

 

3.2 Partes del microscopio compuesto y sus funciones.

A continuación se describen las partes del microscopio y sus funciones. Trate de reconocer cada componente en su microscopio. Observe la figura suministrada si tiene alguna duda.

  • Base: Parte inferior del microscopio que hace contacto con la mesa. Es el punto de apoyo del microscopio.
  • Columna o Brazo: Estructura rígida situada en la parte posterior del microscopio, sostiene el tubo binocular y la platina, y sirve para transportarlo.
  • Tubo: Pieza vertical que sostiene el revólver y el lente ocular.
  • Revólver: Sistema giratorio localizado en la parte inferior del tubo, al cual se incorporan los lentes objetivos.
  • Tornillo macrométrico: Se encuentra en la parte inferior del microscopio. Sirve para alejar o acercar el tubo y la platina. Se obtiene la imagen de la muestra (enfoque o ajuste grueso).
  • Tornillo micrométrico: Generalmente se encuentra incorporado al tornillo macrométrico. Sirve para dar claridad a la imagen. Se logra el ajuste fino.
  • Platina: Lámina con un orificio central en donde se coloca la muestra que se desea observar.
  • Carro: Sistema de pinzas colocado encima de la platina. Sirve para desplazar la muestra hacía adelante y hacía atrás, y de derecha a izquierda.
  • Oculares: Lentes convergentes situados en la parte superior del tubo. Aumentan la imagen que proviene del objetivo. Su aumento es de 10X.
  • Objetivos: Lentes convergentes incorporados en la parte inferior del revólver. Aumenta la imagen del objeto observado. Se tienen 4 lentes de 4X, 10X, 40X y 100X, aunque éstos pueden variar de acuerdo al microscopio. El lente de 100X se le denomina lente de inmersión y para su uso es indispensable el uso de aceite en el portaobjetos.
  • Condensador: Sistema de lentes convergentes encargados de concentrar los rayos de luz en el centro del orificio de la platina. Sirve para enfocar la luz hacia el objeto que se va a examinar.
  • Diafragma o Iris: Esta situado debajo de la platina, inmediatamente debajo del condensador. Sirve para regular la entrada de luz al condensador y se acciona mediante una palanca.

 

3.3 Preparación de una placa temporal.

  • Tome un portaobjetos y un cubreobjetos. Asegúrese de que estén limpios.
  • Coloque el portaobjetos sobre la mesa y deje caer una gota de agua en el centro de la placa.
  • Recorte una o dos letras del papel suministrado y colóquelo sobre la gota.
  • Coloque el cubreobjetos sobre el portaobjetos formando un ángulo de 45 grados entre el portaobjetos y el cubreobjetos. Déjelo caer lentamente para evitar la formación de burbujas en la placa.

 

3.4 Observación de la muestra:

Colocar la placa ya preparada sobre la platina de tal manera que quede bien ajustada. Enfoque con el objetivo de 4X utilizando el tornillo macrométrico. Abra el diafragma hasta que obtenga una buena iluminación de la muestra. Utilice el tornillo micrométrico para obtener mayor nitidez.

Luego gire lentamente el revólver para colocar el objetivo 10X. Utilice el tornillo micrométrico para obtener una imagen nítida. No utilice el tornillo macrométrico; éste no es necesario si usted enfocó correctamente con el objetivo de 4X. Si se requiere abra un poco el diafragma para aumentar la entrada de luz. Repita la operación con el lente de 40X.

Al terminar su observación gire lentamente el revólver y coloque el objetivo de 4X y retire el portaobjetos.

Cuando termine de usar el microscopio coloque el control de la luz en 0 y apague el microscopio. Desconéctelo, enrolle el cordón y cúbralo con el cobertor plástico. Guarde el microscopio en el locker correspondiente.

 

3.5 Determinación del poder de aumento:

El poder de aumento es la capacidad que posee el microscopio para dar una imagen aumentada de un objeto. El microscopio compuesto consta de dos lentes que aumentan la imagen, los oculares y los objetivos. El poder de aumento del microscopio se calcula multiplicando el aumento del ocular por el aumento del objetivo utilizado. El ocular de los microscopios que se utilizarán en el laboratorio es de 10X.

¿Cuál será el poder de aumento cuando se estén utilizando cada uno de los objetivos de 4X, 10X, 40X y 100X?

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3.6 Determinación del diámetro del campo visual del microscopio:

La información del tamaño del diámetro del campo visual se utiliza para estimar el tamaño de las estructuras o de los organismos que se estén observando en el microscopio. Es importante tener las medidas correspondientes para cada uno de los objetivos.

Prepare una placa temporal con un pedacito de papel milimitrado. Enfoque con el objetivo de 4X y enfoque una línea de tal forma que se visualice lo que se ilustra en la figura 1. Determine a cuántos milímetros y fracciones de milímetro corresponde el diámetro del campo visual. Anote este dato.

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Coloque la muestra en el objetivo de 10X y haga el mismo ejercicio. A cuántos milímetros o fracciones corresponde el diámetro?

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Es la relación entre el diámetro y el poder de aumento directa o inversa?

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¿Cómo podría calcularse el diámetro de los lentes de 10X, 40X y 100X conociendo el valor del diámetro hallado utilizando el objetivo de 4X?

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Anote los datos del diámetro del campo visual para cada uno de los objetivos.

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3.7 Unidades más utilizadas en mediciones microscópicas

La mayoría de organismos y estructuras que se estudian con el microscopio son muy pequeños. Las medidas más comúnmente usadas en microscopía son el angstrom (Å), la milimicra (mµ), la micra (µ) y el milímetro.

Las relaciones entre ellas son las siguientes:

  • 1 mm = 1000 µ
  • 1 µ = 1000 mµ
  • 1 mµ = 10 Å

 

Teniendo en cuenta estos datos resuelva los siguientes ejercicios:

a. A cuántas mµ equivale 1 mm? ____________________________________________________________

 

b. A cuántas mµ equivale 1 Å? ______________________________________________________________

 

c. El diámetro del campo visual de un microscopio es de 1500 µ cuando se observa con un ocular de 10X y un objetivo de 10X. ¿Cuál será el diámetro del campo visual si se observa con un objetivo de 40 X y el mismo ocular?

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d. Un estudiante observó una célula al microscopio utilizando un objetivo de 10X y un ocular de 10X y se dio cuenta de que su tamaño aproximado era de una cuarta parte del diámetro de ese campo visual. Si tal diámetro mide 1600 µ: ¿Cuánto mide la célula? ¿ Se observará completamente esa célula si se utiliza un objetivo de 40X y el mismo ocular de 10X?

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e. Realice las siguientes conversiones:

  • 0.025 mm en µ y en Å _____________________________________________________________
  • 5 x 10 mµ en mm y en Å ___________________________________________________________
  • 1300 Å en mµ, en µ y en mm ________________________________________________________